配制
環(huán)凱培養基必須使用高質(zhì)量的水，如石英玻璃蒸餾器經(jīng)三次蒸餾或超純水凈化裝置制備的水。因為其缺乏了血清中天然成分中和毒素、保護細胞的大分子，既便水中的有毒物質(zhì)含量甚微，也可能對細胞產(chǎn)生致死性損害。這是無(wú)血清培養能否成功的關(guān)鍵因素之一。
補充因子是代替血清的各種因子的總稱(chēng)。環(huán)凱培養基必須補加3-8種因子，胰島素和轉鐵蛋白是必須補充因子，其他多數為輔助作用的因子。按其功能不同，補充因子可分為五類(lèi)：
1、結合蛋白：常見(jiàn)如轉鐵蛋白和牛血清白蛋白。轉鐵蛋白與細胞上的轉鐵蛋白受體結合是細胞獲取鐵元素的主要來(lái)源。白蛋白與脂類(lèi)、激素、維生素、金屬離子和生長(cháng)因子結合后可調節上述物質(zhì)在無(wú)血清培養基中活性的作用，此外，由于牛血清白蛋白一般添加量比較大，可增加培養基的粘度，保護細胞免受機械損傷。
2、激素和生長(cháng)因子：很多細胞用無(wú)血清培養時(shí)需要加入激素，如胰島素、生長(cháng)激素、胰高糖素等。胰島素是重要的細胞存活因子，與細胞上的胰島素受體結合后可促進(jìn)RNA、蛋白質(zhì)和脂肪酸的合成，抑制細胞凋亡。此外，雌二醇、孕酮等也是無(wú)血清培養基中常添加的補充因子。
3、酶抑制劑：培養貼壁生長(cháng)的細胞，需要用胰酶消化傳代，在無(wú)血清培養基中須含酶抑制劑，以終止酶的消化作用，達到保護細胞的目的。
4、貼壁因子：許多細胞必須貼壁才能生長(cháng)，這種情況下無(wú)血清培養基中一定要添加促貼壁和擴展因子，一般為細胞外基質(zhì)，如纖粘連蛋白、膠原蛋白等。它們還是重要的分裂素以及維持正常細胞功能的分化因子，對許多細胞的繁殖和分化，起著(zhù)重要作用。纖粘連蛋白主要促進(jìn)來(lái)自中胚層細胞的貼壁與分化，這些細胞包括成纖維細胞、肉瘤細胞、粒細胞、腎上皮細胞、腎上腺皮質(zhì)細胞、CHO細胞、成肌細胞、CHO細胞等。
5、其他補充因子：一些細胞培養使用的無(wú)血清培養基還需要補充微量元素、維生素、脂類(lèi)等低分子量物質(zhì)。
